第一章 上帝的手术刀(第3/3 页)
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[1]RNP:核糖核蛋白复合物。是向导RNA和Cas蛋白的复合体,向导RNA可以找到要剪的基因片段的位置,Cas蛋白可以把DNA剪断。
[2]腺病毒:一种无外套膜的双链DNA病毒,有很高的基因包装能力,常作为基因编辑载体。
[3]CRISPR:成簇的规律间隔的短回文重复序列。将它配合上相关的核酸内切酶(简称Cas)就可以切割DNA。CRISPR-CAS技术与锌指核酸酶技术、“神话”核酸酶(TALEN)技术并称基因编辑三大“剪刀”。
[4]脱靶:CRISPR-CAS的识别序列通常是20个左右碱基对,相对于生物的DNA很短,这种短碱基片段在DNA长链中随处可见。所以用它剪切DNA的时候,可能也同时剪掉了非靶标位点,造成各种乱七八糟的突变,导致细胞死亡。
其次,CRISPR-CAS对错误的容忍度比较高,即便某一段碱基片段与靶标片段不完全一致,也能发挥剪切作用,造成脱靶。总之,只要是剪错了地方,就叫做脱靶。
再者,CAS发挥作用时,需要靶标基因的上游存在一个特定的短的碱基序列,称之为PAM序列(对于最广泛使用的CRISPR-CAS9,一般为NGG,其中N为任意一种碱基)。如果实际操作中靶标基因片段上游到处都没有PAM序列,则CRISPR-CAS系统无法发挥剪切作用。这种情况也可以叫做脱靶。
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